【应用简介】

细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础，与细胞凋亡、细胞周期等是肿瘤研究的重要表型，同时也是分子生物学和药理学研究的重要内容。MTT或CCK8是检测细胞增殖的常用手段，可研究药物对细胞的毒性作用；或探究过表达或干扰细胞中某个基因对细胞增殖能力的影响，为进一步研究基因的功能提供依据等。

【MTT技术原理】

MTT(噻唑蓝)，可透过细胞膜进入细胞内，活细胞线粒体中的脱氢酶能使外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶并沉积在细胞中，而死细胞无此功能；结晶物能溶于DMSO中，通过酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，间接反映活细胞数量（一定范围内，OD值越大，细胞活性越强）。

【CCK8技术原理】

 CCK-8试剂中的WST-8，可在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被活细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物；用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞量（一定范围内生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比）。

【实验方法】

Step1：细胞培养及状态调整；

Step2：铺板；

Step3：过夜培养，待细胞贴壁及稳定；

Step4：药物处理；

Step5：MTT呈色：避光加MTT溶液，37℃孵育4 h，孵育完成后除尽孔内上清，每孔加150μL DMSO，振荡10min；

             CCK-8呈色：避光加CCK-8溶液，孵育37℃ 1-4 h；

Step6：上机检测：MTT-490nm；CCK8-450nm；

Step7：分析数据：以OD值或细胞相对存活率作图。

注：如研究某基因对细胞增殖能力的影响，采取先转染后铺板的原则。